Etiology, multidrug resistance, and acute-phase proteins biomarkers as in equine septic arthritis / Etiologia, resistência antimicrobiana e proteínas de fase aguda como biomarcadores na artrite séptica equina

ABSTRACT: Etiology, multiple antibiotic resistance index, and acute-phase protein profile in the serum and synovial fluid of 44 horses presenting septic arthritis were investigated. Young animals up to 24 months of age not yet submitted to taming were sampled. Synovial samples from the horses were submitted to culture and bacterial isolates subjected to 18 antimicrobials to investigate the in vitro multidrug resistance pattern. Also, hematological aspects, fibrinogen, and serum levels of some acute-phase proteins (total protein, albumin, globulin, amyloid A, and C-reactive protein) were assessed. To statistical analysis, microbiological isolation were divided into four groups: G1 = animals with negative isolation, G2 = isolation of Gram-negative bacteria, G3 = isolation of Gram-positive bacteria), and G4 = isolation of fungi. Microbial isolation was obtained from 77.2% (32/44) of the synovial samples. Escherichia coli (7/44 = 15.9%), Staphylococcus aureus (5/44 = 11.4%), Streptococcus equi subsp. equi (3/44 = 6.8%), Aspergillus niger (3/44 = 6.8%), Pseudomonas aeruginosa (2/44 = 4.5%), Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (1/44 = 2.3%), Trueperella pyogenes (1/44 = 2.3%), and Rhodococcus equi (1/44 = 2.3%) were prevalent bacterial agents. Aspergillus niger is reported by the first time as a primary agent of septic arthritis in horses. Gentamicin (84.9%), marbofloxacin (79.3%) and ceftriaxone (72.4%) were the most effective antimicrobials, whereas high resistance of the isolates (>50%) was found to erythromycin (75.9%), clarithromycin (75.9%), penicillin (69%), clindamycin (58.6%), and streptomycin (55.2%). Multiple antibiotic resistance index (≥ 0.3) was identified in 50% (16/32) of the isolates, with highest resistance in Gram-negative bacterial isolates. Serum levels of amyloid A, C-reactive protein, fibrinogen, globulin, and total protein, as well as the number of nucleated cells in the synovial fluid had values above the reference for horses, reinforcing acute-phase proteins as biomarkers in diagnosis of septic arthritis. We highlighted the diversity of microorganisms that may be involved in equine septic arthritis, the high resistance of bacterial isolates to conventional antimicrobials, the high lethality of young horses with septic arthritis, and importance of in vitro antimicrobial susceptibility pattern tests to therapeutic approaches in the disease.

RESUMO: Foram investigados a etiologia, o índice de resistência múltipla aos antibióticos e o perfil de proteínas de fase aguda, no soro ou líquido sinovial, de 44 equinos com sinais clínicos compatíveis com artrite séptica. Foram amostrados animais até 24 meses de idade não submetidos a doma. As amostras de líquido sinovial dos 44 animais foram submetidas à cultura bacteriológica e fúngica, e os isolados bacterianos submetidos in vitro diante de 18 antimicrobianos visando investigar a multirresistência. Também foram avaliados os aspectos hematológicos e o fibrinogênio sérico, bem como os níveis séricos de certas proteínas de fase aguda (proteína total, albumina, globulina, amilóide sérico A e proteína C reativa). O isolamento microbiano das amostras foi dividido em quatro grupos: G1 = animais com isolamento negativo; G2 = isolamento de bactérias Gram-negativas; G3 = isolamento de bactérias Gram-positivas e G4 = isolamento fúngico. O isolamento microbiano foi obtido em 77,2% (32/44) das amostras de líquido sinovial. Escherichia coli (7/44 = 15,9%), Staphylococcus aureus (5/44 = 11,4%), Streptococcus equi subsp. equi (3/44 = 6,8%), Aspergillus niger (3/44 = 6,8%), Pseudomonas aeruginosa (2/44 = 4,5%), Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (1/44 = 2,3%), Trueperella pyogenes (1/44=2,3%) e Rhodococcus equi (1/44 = 2,3%) foram os patógenos mais frequentes. Aspergillus niger é relatado pela primeira vez como agente primário de artrite séptica em cavalos. Gentamicina (84,9%), marbofloxacino (79,3%) e ceftriaxona (72,4%) foram os antimicrobianos mais eficazes, enquanto elevada resistência dos isolados (>50%) foi encontrada para eritromicina (75,9%), claritromicina (75,9%), penicilina (69%), clindamicina (58,6%) e estreptomicina (55,2%). O índice de resistência múltipla aos antibióticos (≥ 0,3) foi identificado em 50% (16/32) dos isolados, com maior resistência obervada em bactérias Gram-negativas. Os níveis séricos de amilóide A, proteína C reativa, fibrinogênio, globulina e concentração total de proteínas, bem como o número de células nucleadas no líquido sinovial apresentaram valores acima da referência para equinos saudáveis, reforçando o uso destas proteínas de fase aguda como biomarcadores no diagnóstico da doença. O presente estudo enfatiza a diversidade de microrganismos que podem estar envolvidos na artrite séptica equina, a alta resistência dos isolados aos antimicrobianos convencionais, a alta mortalidade de equinos jovens com artrite séptica e a importância de realizar o tratamento da afecção com respaldo em testes de sensibilidade microbiana in vitro.

Tetanus in horses: an overview of 70 cases / Tétano em equinos: um panorama de 70 casos

Tetanus is characterized by high case fatality rates in horses. Comprehensive case series studies involving equine tetanus from different geographic areas enable the evaluation of prognosis, efficacy of treatment, and control measures. We retrospectively investigated some selected epidemiological data (breed, age, gender, use of the horses, history of vaccination, seasonality, presence of wound/history of surgical procedures, clinical outcomes) and main clinical aspects (clinical signs, incubation period, length of hospitalization, and period between onset signs and hospitalization) in 70 cases of equine tetanus over 1990-2015, with emphasis in the association between these data and the clinical outcomes. High mortality rate (72.9%) was observed in this study. Forty (57.1%) horses presented history of wounds or surgical procedures related with tetanus, represented mainly by lesions in the hind limbs (42.5%), front limbs (15.0%), umbilical infections (7.1%), castration (4.3%), and face wounds (4.3%). Hyperesthesia, limb spasticity, cervical stiffness, tetanic spasms, and restriction of jaw movement were the main consistent clinical signs. Besides no statistical association, all the horses with umbilical infections, wounds in face, prolonged recumbency, sweating, dysphagia/aphagia died, and together with delay between onset of first clinical signs and prompt veterinary assistance (< 5 days) were considered indicative of poor prognosis; whereas there was a significant association (p=0.001) between survival and length of hospitalization > 7 days, seemed as an evidence of good prognosis. The high mortality rate of tetanus, even in horses under specific treatment, highlight the need for early diagnosis, prompt veterinary assistance, and establishment of prophylatic measures in equine farms.(AU)

Tétano é caracterizado por elevada mortalidade em equinos. Estudos envolvendo séries de casos da doença provenientes de diferentes áreas geográficas possibilitam avaliar o prognóstico, eficácia do tratamento e ações de controle. Foram avaliados, retrospectivamente, os principais achados epidemiológicos (raça, idade, sexo, uso dos equinos, história de vacinação, sazonalidade, presença de lesões/histórico de procedimentos cirúrgicos e evolução dos casos) e aspectos clínicos (sinais clínicos, período de incubação, tempo de hospitalização e período entre início dos sinais e hospitalização) em 70 casos de tétano em equinos atendidos entre 1990 e 2015, com ênfase na associação entre os dados clínico-epidemiológicos e a evolução dos casos (mortalidade). Foi observada alta mortalidade (72,9%) nos equinos. Do total de equinos, 57,1% apresentavam lesões ou histórico de procedimentos cirúrgicos relacionados com tétano, representados principalmente por lesões em membros posteriores (42,5%), membros anteriores (15,0%), infecções umbilicais (7,1%), castração (4,3%) e lesões de face (4,3%). Hiperestesia, espasticidade dos membros, rigidez de pescoço, espasmos tetânicos e restrição aos movimentos de mandíbula foram os principais sinais clínicos observados. Apesar da ausência de significância estatística, todos os animais com presença de infecções umbilicais, lesões na face, decúbito prolongado, sudorese e disfagia/afagia evoluíram para óbito e, associado ao início dos sinais clínicos e a demora no atendimento (< 5 dias), foram considerados indicativos de prognóstico reservado. Em contraste, foi observada associação significante (p=0,001) entre a sobrevivência dos animais e o tempo de hospitalização maior que 7 dias, considerado uma indicação de bom prognóstico. A elevada mortalidade do tétano, mesmo em equinos tratados, enfatiza a necessidade do diagnóstico precoce, do rápido atendimento veterinário e adoção de medidas profiláticas nos criatórios.(AU)

Citologia aspirativa no diagnóstico da linfadenite em ovinos / Fine needle aspiration in diagnosis of lymphadenitis in sheep

O presente estudo investigou o uso da cito-(73,0 por cento), Arcanobacterium pyogenes (6,0 por cento), Streptococlogia aspirativa com agulha fina no diagnóstico da lin-cus spp. β hemolítico (5,0 por cento) e Escherichia coli (4,0 por cento) fadenite em ovinos e a ocorrência de microrganismos foram os microrganismos mais frequentes nos animais nos linfonodos com lesões, com ênfase no isolamento de com linfadenite. Streptococcus spp. (21,0 por cento) e Staphylo-Corynebacterium pseudotuberculosis. Foram utilizados coccus spp. (7,0 por cento) foram as bactérias isoladas com 100 linfonodos de ovinos com aumento de volume su-maior frequência nos linfonodos sem lesões colhidos em gestivos de linfadenite e 100 linfonodos de ovinos sem abatedouro. A punção aspirativa com agulha fina perlesões, colhidos em abatedouro. C. pseudotuberculosis mitiu identificar microrganismos "corineformes" em 79 (79,0 por cento) animais com linfadenite e, destes, 73 (73,0 por cento) foram identificados como C. pseudotuberculosis. Nenhuma linhagem de C. pseudotuberculosis foi isolada dos linfonodos dos animais sem lesões. Concluiu-se que C. pseudotuberculosis foi o microrganismo mais freqüente nos ovinos com linfadenite, e que a citologia aspirativa pode ser utilizada como método de triagem no diagnóstico da linfadenite caseosa ovina.

The fine needle aspiration in diagnosis of lymphadenitis in sheep, and occurrence of microorganisms in the lymph nodes, with emphasis to identification of Corynebacterium pseudotuberculosis were investigated. One hundred sheep with lymphadenitis and 100 lymph nodes without lesions collected from sheep in slaughterhouses were evaluated. C. pseudotuberculosis (73.0 percent), Arcanobacterium pyogenes (6.0 percent), Streptococcus spp. β hemolytic (5.0) and Escherichia coli (4.0 percent) were the more frequent causal agents in sheep with lymphadenitis. Streptococcus spp. (21.0 percent) and Staphylococcus spp. (7.0 percent) were the more common microorganisms identified in lymph nodes without lesions sampled in slaughterhouse. Fine needle aspiration enable identify 79 (79.0 percent) microorganisms with "corynebacteria" aspect in sheep with lymphadenitis. From these, 73 (73.0 percent) were identified as C. pseudotuberculosis. None strain of C. pseudotuberculosis was isolated from lymph nodes of animals without lesions. The results showed the high frequency of C. pseudotuberculosis in sheep with lymphadenitis, and possibility the use of fine needle aspiration in initial diagnosis of lymphadenitis in sheep.

Interference of vaccinal antibodies on serological diagnosis of leptospirosis in vaccinated buffalo using two types of commercial vaccines

The vaccinal antibodies interference represents one of the Microscopic Agglutination test - MAT limitation in the animal leptospirosis serum diagnosis. Prospective studies showing the dimensions of this effect are rare in buffaloes. This study aimed to determine the anti-Leptospira serum agglutinin profile in vaccinated female buffaloes using two types of commercial vaccines against leptospirosis: bacterin (whole bacterial cell) and purified outer membrane and to evaluate the vaccinal interference on serum diagnosis. Three groups of 11 adult buffalo females were established: G1-control, non-vaccinated, G2- vaccinated with bacterin vaccine with six serovars, G3- outer membrane purified vaccine with five serovars. A booster dose was administrated 30 days after the first vaccination (dpv) and two re-vaccinations six months a part (210 and 390 dpv). Serum samples were collected on days 0, 15, 40, 45, 60 and every 30 days until 540 dpv. G1, G2 and G3 serum samples were submitted to MAT with the serovars present in the vaccines. G1 remained always negative. Both vaccines induced serologic responses in MAT at 150 dpv against all serovars and they revealed maximum titers around 45 and 60dpv as follows: Pomona: G2 (1600) and G3 (3200); Hardjo: G2 and G3 (1600); Wolffi: G2 (800) and G3 (1600); Icterohaemorrhagiae: G2 and G3 (800); Grippotyphosa: G2 and G3 (200) and Canicola: G2 (NR) and G3 (400). Even though, the Wolffi serovar is not present in the purified outer membrane vaccine, G3 showed a response to that serovar, probably due to cross reaction to the serovar Hardjo. The G3 titers were higher and appeared earlier than in G2, but with similar serologic profiles. At the re-vaccination there was an increase on agglutinin levels, but of less intensity than those previously observed. After six months from the second revaccination (540 dfv), G2 and G3 were almost negative, which demonstrated the short diagnostic interference.

A persistência de anticorpos vacinais representa um dos entraves para o sorodiagnóstico da leptospirose. Raros estudos dimensionam prospectivamente esse efeito na espécie bubalina. O presente trabalho objetivou traçar o perfil de aglutininas séricas anti-Leptospira spp.em búfalas vacinadas contra leptospirose com dois tipos de vacina comercial : bacterina e de membrana externa purificada e avaliar a interferência temporal dos títulos vacinais no sorodiagnóstico. Três grupos de 11 fêmeas bubalinas adultas: G1- controle não vacinado, G2 -vacinado com bacterina contendo seis sorovares e G3- recebeu vacina com membrana externa purificada de cinco sorovares, receberam reforço 30 dias pós primo vacinação (dpv) e duas revacinações semestrais nos dias 210 e 390. Foram colhidas amostras sorológicas nos dias 0, 15, 30, 45, 60 e a cada 30 dias até 540 dpv e analisadas pela reação de Soroaglutinação Microscópica-SAM frente aos sorovares presentes nas vacinas. G1 manteve-se sempre negativo. Ambas vacinas induziram resposta sorológica na SAM aos 15° dpv para todos os sorovares e revelaram títulos máximos ao redor do 45° e 60° dpv.: Pomona: G2 (1600) e G3 (3200); Hardjo: G2 e G3 (1600); Wolffi: G2 (800) e G3 (1600), Icterohaemorrhagiae: G2 e G3 (800), Grippotyphosa: G2 e G3 (200) e Canicola: G2 (NR) e G3 (400). Apesar da vacina de membrana externa não possuir o sorovar Wolffi, G3 revelou resposta para este sorovar, provavelmente pelo sorovar Hardjo vacinal. Os perfis sorológicos representados graficamente pela média geométrica dos títulos de aglutininas foram semelhantes, porém em G3 mais precoces e mais elevados que G2. Na revacinação houve aumento do nível de aglutininas, porém de menor intensidade que o anterior; e ao final de seis meses da segunda revacinação (540 dpv) eram quase nulos, demonstrando curta duração da interferência ao diagnóstico.